荧光分光光度计之光谱精确测定

相对于吸收光谱法可以测定照射光的减少，荧光分析法则因为可以观察到发光，因此，照射到的光与测定到的光的波长是不同的。
与吸收光谱法相比，荧光分析法具有检测灵敏度更高（在低浓度条件下检测），获取信息更多（可获取激发光谱和荧光光谱）的优势。
然而，荧光光度计光学部件（如灯等）所特有的波长特性可能会造成不同设备之间的检测差异，另外由于光的散射效应，多重光（如次要光等）可能会干扰检测。
我们在此向您介绍一种校正（减少）设备检测差异的一种方法和一种消除光散射的方法。

有效利用滤光器组件有效利用光谱校正工具组合

有效利用滤光器组件

在表面光度测定中，由于光的散射效应，多重光（如次要光等）可能会干扰检测。
截止滤光器可有效抑制多重光。根据斯托克斯原理，与激发光相比，荧光可以通过更长波长测定。我们的截止滤光器正是利用了这一原理。
我们将通过分析水杨酸钠（粉末）获得的数据来说明截止滤光器的效果。使用滤光器（UV35）可消除光散射，把光引向探测器，以控制次要光的产生。

右图数据取自三维数据。从这二维数据上看，第二条光线正在被消除。

有效使用光谱校正工具组件

我们在此向您介绍光谱校正方法，以获得精确的光谱。荧光光度计的每个光源灯或探测器都有其各自的波长特性。
由于检测到的光谱数据通常带有上述仪器的波长特性，要获得真实的光谱，必须进行校正。我们在此向您展示一套光谱校正工具组件的检测效果。这套组件通常包括一份罗丹明B浓缩液和一个副标准光源。
以下是通过分析水杨酸钠（粉末）获得的数据进行光谱校正后的效果。三维数据随光谱校正的有无发生变化，直观地说明了波长特性效果。