睾酮及其代谢物的同时分析

通常情况下，服用的药物主要在肝脏通过细胞色素P450（CYP）进行代谢。
CYP是一种酶，可将摄入人体的异物转换为易于排出体外的形式。
CYP包含多个分子种类，其中9种（CYP1A2, 2A6, 2B6, 2C8, 2C9, 2C19, 2D6, 2E1, 3A4）主要和药物的代谢有关。尤其是其中的CYP3A4，据说半数以上的市售医药品可受其代谢。
本文介绍以CYP3A4为指标物质的睾酮和睾酮的代谢生成物 6β-羟基睾酮 的分析。

* 本反应乃是作为药物代谢评价中HLM（人肝微粒体）活性评价指标的代谢反应。

睾酮及其代谢物的同时分析

样品

睾酮（人肝微粒体反应液）
睾丸代谢物（6β-羟基睾酮，6β-OH TES）是一种类固醇激素，将其添加至市售人肝微粒体（HLM）。

样品前处理方法

0.2 mg/mL 人肝微粒体
10 mM Kpi (pH 7.4)
200 µM 睾酮
NADPH 生成系统
共计 200 µL

在 37°C 下培养 30分钟

用 2 mL CH₂Cl₂终止反应

添加浓度为 3 M 的NaCl mL

添加浓度为 20 µL 的皮质酮 20 µM 作为内标物

Vortex vigorously

以 2,000 rpm 的转速离心分离 5分钟

收集有机物层

氮气干燥

用 200 µL 流动相溶解

进样 10 µL 至 HPLC

色谱条件

色谱柱	HITACHI LaChrom C18 (5 µm) (4.6 mmI.D. x 150 mm) HITACHI LaChrom C18 (3 µm) (4.6 mmI.D. x 100 mm)
流动相	50% CH₃OH/10 mM 磷酸钾缓冲液 (pH 7.4)
流速	1.0 mL/min
柱温	35°C
检测波长	UV 240 nm
进样量	10 µL